Reactivo de detección de PCR en tiempo real de polvo liofilizado LyoDt® para Vibrio cholerae O1 - no se requiere cadena de frío y se dispone previamente una prueba única

LyoDt^® Reactivo de detección por PCR en tiempo real liofilizado para 48

Manual de uso1. DESCRIPCIÓN

Vibrio cholerae es una bacteria Gram-negativa que causa el cólera, una enfermedad infecciosa intestinal aguda caracterizada por un inicio rápido, alta transmisibilidad y mortalidad significativa. Como enfermedad en cuarentena según el Reglamento Sanitario Internacional, incluye principalmente los serogrupos O1 y O139

48Este producto es un reactivo de PCR en tiempo real liofilizado ≤40 

detección de Vibrio cholerae  O148≤40 de  Vibrio cholerae  O148 2. ESPECIFICACIONES Y COMPOSICIÓN Cat No.

Descripción

Almacenar  a temperatura ambiente

(5-30°C )0 segundosVol. /prueba ≤40 Una vez que se abre el paquete al vacío, guarde los productos no utilizados en la bolsa de plástico resellable provista con los desecantes, ≤40  en la bolsa de papel de aluminio.PRECAUCIÓN:Si el gránulo de reactivo se vuelve más pequeño, es una indicación de que la humedad se filtra en el tubo y el reactivo se humedece. Cualquier reactivo con un tamaño de gránulo significativamente más pequeño de lo habitual debe desecharse o probarse con el control positivo antes de su uso 

para la prueba de muestras 

.    4. EQUIPOS Y REACTIVOS ADICIONALES REQUERIDOS1) 

Instrumento de PCR en tiempo real

cido Pip

Preparación del control positivo y puntas3) Agua libre de

Pnucleasas4) Kit de extracción de ácidos nucleicos

TemperaturaABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600

.

6. MUESTRAS ACEPTABLES≤40

7. PROCEDIMIENTO DE OPERACIÓN

1) 

Á

cido N  ExtracciónExtraer

ADN de las muestras utilizando un kit de extracción adecuado. Se recomienda que el ADN se eluya con aproximadamente 100μl de tampón de elución ()o  H libre de nucleasas2_°C)Vol. /prueba extracción. Debe rehidratarse antes de su uso 2) 

Preparación del control positivoEl control positivo se puede almacenar a temperatura ambiente antes de la rehidratación

hasta 12 meses . Debe rehidratarse antes de su uso agregando 250 μl de tampón TE o H2O libre de nucleasas, vortexe a baja velocidad durante 15-20 segundos y centrifugue a baja velocidad durante 15-20 segundos. Usar inmediatamente o almacenar a -20_°C.3) PCR en tiempo real 0 segundos≤40

PreparaciónA) Abra el paquete al vacío y saque la tira de 8 tuboss que contiene el reactivo. Verifique que el gránulo esté en el fondo del tubo(

Corte el número de tubos según sea necesariosi es necesario ). Si los tubos proporcionados no son compatibles con su instrumento, transfiera el gránulo de reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento. B) Abra los tubos y deseche la(s) tapa(s) (no aptas para máquinas de PCR en tiempo real) y prepare la mezcla de reacción sobre hielo como se indica a continuación.ComponenteVol. /prueba Reactivo liofilizado

1

D) Vortexe los tubos a baja velocidad durante 10~15 segundos y centrifugue a 3000 rpm durante 20 segundos y colóquelos en un instrumento de PCR en tiempo real.

4) Configuración de RT-PCREstablezca el volumen de reacción en 25μl y el procedimiento de amplificación de PCR como se indica a continuación. Recoja la fluorescencia FAM a 60°C y seleccione NINGUNO como referencia pasiva.

Paso

TemperaturaTiempo

Ciclos Pre-desnaturalización

Interpretación  MoldeCTInterpretaciónControl positivo