Kit de prueba rápida de seguridad alimentaria para la detección de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) con reactivo de PCR en tiempo real liofilizado, sin necesidad de cadena de frío

1.Descripción

Escherichia coli enterohemorrágica(EHEC) es un grupo deE. colicepas capaces de causar diarrea hemorrágica y enteritis en humanos, siendo el serotipo O157:H7 la cepa más representativa.Leche cruda, aves de corral y sus productos, así como frutas y verduras, siendo la carne de vacuno el principal vehículo de transmisión.

Este producto es un reactivo de PCR en tiempo real liofilizadopara el detección deEscherichia coliO157:H7. Utiliza el altamente conservado el rfbE género deEscherichia coliO157:H7 como el objetivo de detección. Se trata de una mezcla maestra que contiene todos los ingredientes necesarios, excepto el ADN modelo, y se pre-dispone como prueba única en tubos de PCR para facilitar su uso.Este producto no requiere cadena de frío para su transporte y almacenamiento, lo que reduce significativamente los costes de transporte y elimina las posibles pérdidas por desperdicio de reactivos y contaminación por aerosoles.

2. especificaciones y composición

3. Almacenamiento Y vida útil

Almacenamientoa temperatura ambiente (5 a 30)°C). Es estable hasta 12 meses. Una vez abierto el envase al vacío, guarde los productos no utilizados en la bolsa de plástico reconductible con los desecantes.yen la bolsa de papel de aluminio. 

Precaución: 

La reducción del tamaño del pellete de reactivo indica que la humedad se filtra en el tubo y que el reactivo se humedece.Todos los reactivos con un tamaño de pellets significativamente menor que el habitual deben desecharse o probarse con control positivo antes de su uso. para ensayo de muestras.

4Se requieren equipos y reactivos adicionales.

1) elInstrumento de PCR en tiempo real

2) el- ¿ Qué pasa?Lasy propinas

3) elSeparación-agua libre

4) elKit de extracción de ácido nucleico

5. SISTEMAS de PCR en tiempo real compatibles

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600 y otros productos de la misma categoría..

6. muestras aceptables

Enriquecimiento de los alimentos con caldo, vómitos, muestras de diarrea, etc.

7. PROCEDIMENTO de la operación

1) elEl núcleoA. NoCID- ¿ Por qué?extracción

ExtractoEl ADNde las muestras con un kit de extracción adecuado.Se recomienda que elEl ADNse eluye con aproximadamente 100 μl de búfer de elución(Técnica de trabajo o bienH libre de nucleasas₂¿ Qué?)en la etapa final deextracción.El ácido nucleico purificado debe utilizarse inmediatamente o almacenarse a -20°C.

2) elPreparación del control positivo

El control positivo puede almacenarse a temperatura ambiente antes de la rehidratación. durante un máximo de 12 meses.Es...debe rehidratarse antes de su usoañadiendo250Mlde amortiguador TE o nsin escasezH.₂¡Oh, qué bueno!Se utilizará de inmediato o se conservará en un lugar seguro.en -20°C.

3) elPCR en tiempo realM.IXPreparación

A) Abrir el paquete de vacío y sacar la tira de 8 tuboselCompruebe que el grano esté en la parte inferior del tubo. (Cortar el número de tubos según sea necesario si esNecesario)Si los tubos suministrados no son compatibles con su instrumento, transfiera el pellete de reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento.

B) Abrir los tubos y desechar las tapas (no adecuadas para máquinas de PCR en tiempo real) y preparar la mezcla de reacción sobre hielo como se indica a continuación.

* Se puede utilizar agua libre de nucleasas como control negativo.

C) LasLa PCR se cubre con tapas (tiras) adecuadas para la PCR en tiempo real.(no proporcionado).

D) Vorticear los tubos a baja velocidad durante 10 a 15 segundos, centrifugar a 3000 rpm durante 20 segundos y colocarlos en un instrumento de PCR en tiempo real.

4) elConfiguración de RT-PCR

Establezca el volumen de reacción en 25μl y el procedimiento de amplificación de PCR como se indica a continuación. fluorescencia a 60 °C y seleccione NUNCA como referencia pasiva.

5) Las demásResultadoA. NoanálisisyYo...La interpretación