LyoDt® Kit de detección PCR en tiempo real para Salmonella en polvo liofilizado

 Kit de detección por PCR en tiempo real LyoDt® para Salmonella en polvo liofilizado

1. INTRODUCCIÓN

Salmonella es una enterobacteria Gram-negativa y un patógeno común transmitido por alimentos. Estas bacterias están ampliamente distribuidas en la naturaleza y colonizan frecuentemente los intestinos de humanos y animales, particularmente aves de corral, ganado y mascotas. Los principales vehículos alimentarios para la contaminación por Salmonella incluyen: carne y productos cárnicos, huevos y productos de huevo, leche y productos lácteos, etc.

Este producto es un reactivo de PCR en tiempo real liofilizado para la detección de Salmonella. Utiliza el gen invA altamente conservado de Salmonella como objetivo de detección. Es una mezcla maestra que contiene todos los ingredientes necesarios, excepto el ADN de la plantilla, y se dispensa previamente como una sola prueba en tubos de PCR para facilitar su uso. Este producto no requiere cadena de frío para el transporte y almacenamiento, lo que reduce significativamente los costos de envío y elimina posibles pérdidas por desperdicio de reactivos y contaminación por aerosoles.

2. ESPECIFICACIONES Y COMPOSICIÓN

3. ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL

Almacenar a temperatura ambiente (5-30°C). Es estable hasta por 12 meses. Una vez abierto el empaque al vacío, guarde los productos no utilizados en la bolsa de plástico resellable provista con los desecantes y en la bolsa de papel de aluminio.

PRECAUCIÓN:

Si el pellet del reactivo se vuelve más pequeño, es una indicación de que la humedad se filtra en el tubo y el reactivo se humedece. Cualquier reactivo con un tamaño de pellet significativamente más pequeño de lo habitual debe desecharse o probarse con el control positivo antes de su uso para la prueba de muestras.

4. EQUIPOS Y REACTIVOS ADICIONALES REQUERIDOS

1) Instrumento de PCR en tiempo real

2) Pipetas y puntas

3) Agua libre de nucleasas

4) Kit de extracción de ácido nucleico

5. SISTEMAS DE PCR EN TIEMPO REAL COMPATIBLES

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. MUESTRAS ACEPTABLES

Caldo de enriquecimiento de alimentos, vómito, muestras diarreicas, etc.

7. PROCEDIMIENTO DE OPERACIÓN

1) Extracción de ácido nucleico

     Extraiga el ADN de las muestras utilizando un kit de extracción adecuado. Se recomienda que el ADN se eluya con aproximadamente 100 μl de tampón de elución  (TE o H libre de nucleasas₂O) en el paso final de la extracción. El ácido nucleico purificado debe usarse inmediatamente o almacenarse a -20°C.

2) Preparación del control positivo

El control positivo se puede almacenar a temperatura ambiente antes de la rehidratación hasta por 12 meses. Debe rehidratarse antes de su uso agregando 250 μl de tampón TE o H libre de nucleasas₂O, agitar en un vortex a baja velocidad durante 15-20 segundos y centrifugar a baja velocidad durante 15-20 segundos. Usar inmediatamente o almacenar a -20°C.

3) Preparación de la mezcla de PCR en tiempo real

A) Abra el empaque al vacío y saque las tiras de 8 tubos que contienen el reactivo. Verifique que el pellet esté en el fondo del tubo (Corte el número de tubos según sea necesario si es necesario). Si los tubos provistos no son compatibles con su instrumento, transfiera el pellet del reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento.

B) Abra los tubos y deseche la(s) tapa(s) (no aptas para máquinas de PCR en tiempo real) y prepare la mezcla de reacción sobre hielo como se indica a continuación.

* Se puede usar agua libre de nucleasas como control negativo.

C) Tape la PCR con tapas (tiras) adecuadas para PCR en tiempo real (no incluidas).

D) Agite los tubos en un vortex a baja velocidad durante 10~15 segundos y centrifugue a 3000 rpm durante 20 segundos y colóquelos en un instrumento de PCR en tiempo real.

2) Configuración de RT-PCR

Establezca el volumen de reacción en 25μl y el procedimiento de amplificación de PCR como se indica a continuación. Recopile la fluorescencia FAM a 60°C y seleccione NINGUNO como referencia pasiva.

3) Análisis e interpretación de resultados