Reactivo de detección de PCR en tiempo real de LyoDt® para Cronobacter en polvo liofilizado

Reactivo de detección de PCR en tiempo real de LyoDt® para Cronobacter en polvo liofilizado

1.El proyecto de ley

El cronobacteres un género de bacterias recién definido, cuyo predecesor esEntrabacter sakazakii. ¿Qué es eso? El cronobacterEs un patógeno grave transmitido por los alimentos, transmitido principalmente a través de la fórmula infantil contaminada, que causa meningitis neonatal, sepsis y enterocolitis necrotizante.

Este producto es un reactivo de PCR en tiempo real liofilizado para la detección deEl cronobacterUtiliza el gen ompA altamente conservado deEl cronobacterSe trata de una mezcla maestra que contiene todos los ingredientes necesarios, excepto el ADN modelo, y se distribuye previamente como un solo ensayo en tubos de PCR para facilitar su uso.Este producto no requiere cadena de frío para su transporte y almacenamiento, lo que reduce significativamente los costes de transporte y elimina las posibles pérdidas por desperdicio de reactivos y contaminación por aerosoles.

2. especificaciones y composición

3. Almacenamiento Y vida útil

Conservar a temperatura ambiente (5-30°C). Es estable durante un máximo de 12 meses. Una vez abierto el envase al vacío, conserve los productos no utilizados en la bolsa de plástico sellable con los desecantes.y en la bolsa de aluminio.

Precaución:

La reducción del tamaño del pellete de reactivo indica que la humedad se filtra en el tubo y que el reactivo se humedece.Todos los reactivos con un tamaño de pellets significativamente menor que el habitual deben desecharse o probarse con control positivo antes de su uso.para ensayo de muestras.

4Se requieren equipos y reactivos adicionales.

1) Instrumento de PCR en tiempo real

2) Pipetas y puntas

3) Agua libre de nucleasas

4) Kit de extracción de ácido nucleico

5. SISTEMAS de PCR en tiempo real compatibles

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600 y otros productos de la misma categoría.

6. muestras aceptables

Enriquecimiento de los alimentos con caldo, vómitos, muestras de diarrea, etc.

7. PROCEDIMENTO de la operación

1) Extracción de ácidos nucleicos

Extraer ADN de las muestras usando un kit de extracción adecuado.Se recomienda que elEl ADNse eluye con aproximadamente 100 μl de búfer de elución(Técnica de trabajoo bienH libre de nucleasas₂O) en el último paso de laextracción.El ácido nucleico purificado debe utilizarse inmediatamente o almacenarse a -20°C.

2) Preparación del control positivo

El control positivo puede almacenarse a temperatura ambiente antes de la rehidratación durante un máximo de 12 meses.₂Utilizar inmediatamente o conservar a -20 °C.

3) Preparación de la mezcla de PCR en tiempo real

A) Abrir el envase al vacío y sacar las tiras de 8 tubos que contienen el reactivo.Si los tubos suministrados no son compatibles con su instrumento, transfiera el pellete de reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento.

B) Abrir los tubos y desechar las tapas (no adecuadas para máquinas de PCR en tiempo real) y preparar la mezcla de reacción sobre hielo como se indica a continuación.

el paso deextracción.El ácido nucleico purificado debe utilizarse inmediatamente o almacenarse a -20°C.

2) Preparación del control positivo

El control positivo puede almacenarse a temperatura ambiente antes de la rehidratación durante un máximo de 12 meses.₂Utilizar inmediatamente o conservar a -20 °C.

3) Preparación de la mezcla de PCR en tiempo real

A) Abrir el envase al vacío y sacar las tiras de 8 tubos que contienen el reactivo.Si los tubos suministrados no son compatibles con su instrumento, transfiera el pellete de reactivo a un tubo óptico compatible con su instrumento.

B) Abrir los tubos y desechar las tapas (no adecuadas para máquinas de PCR en tiempo real) y preparar la mezcla de reacción sobre hielo como se indica a continuación.

* Se puede utilizar agua libre de nucleasas como control negativo.

• Encapsular la PCR utilizando tapas (tiras) adecuadas para la PCR en tiempo real (no se proporciona).

D) Vorticear los tubos a baja velocidad durante 10 a 15 segundos, centrifugar a 3000 rpm durante 20 segundos y colocarlos en un instrumento de PCR en tiempo real.

2) Configuración de RT-PCR

Establezca el volumen de reacción en 25μl y el procedimiento de amplificación de PCR como se muestra a continuación.

3) Análisis e interpretación de los resultados